本发明提供一种小鼠胚胎成纤维细胞直接重编程为黑素细胞的方法,包括如下步骤：制备高质量的浓缩慢病毒用于转染备选转录因子；将小鼠胚胎成纤维细胞直接重编程为黑素细胞；优化筛选可用于黑素细胞直接重编程的转录因子；鉴定诱导黑素细胞的功能。本发明是一种优化的高效的黑素细胞直接重编程方法,简化并优化的黑素细胞直接重编程体系,主要包括两方面：制作高质量浓缩病毒和优化重编程培养基成分,提高直接重编程所得到的黑素细胞的功能；筛选作用最显著的转录因子用于黑素细胞直接重编程；对直接重编程的黑素细胞进行功能鉴定,为色素脱失性疾病比如白癜风的病人提供新的治疗策略。

本发明公开了一种针对悬浮细胞的慢病毒载体及其应用,属于生物技术领域。本发明中的慢病毒载体是以pLVX-EGFP-IRES-Puro为框架,插入了Ubi启动子和Cbh启动子。该慢病毒载体普遍适用于悬浮细胞的表达,表达效率高效、稳定,能够极大程度地提升悬浮细胞中的过表达效果,且表达过程简单易行,易于推广。

本发明公开了一种人肝纤维化诱导模型的工具细胞株构建方法,属于生物技术领域。本发明提供一种重组慢病毒载体,包括插入有绿色荧光基因EGFP及人TGF-β1基因的慢病毒载体,所述慢病毒载体选用Tet-On诱导表达慢病毒系统,基于该重组慢病毒载体可构建一种人肝纤维化诱导模型的工具细胞株。该重组慢病毒载体能通过诱导剂Dox持续诱导TGF-β1的过表达,弥补了传统肝纤维化诱导方法过程中需要持续添加重组的TGF-β1因子操作繁琐、费时、成本高、批次差异大等缺陷；且对细胞的毒性小,且制备方法简单,易于工业化生产。

本发明涉及一种构建用于生产携带目的核酸片段的逆转录病毒载体生产细胞的方法及通过所述方法获得的生产细胞。

本发明公开了一种CRISPR/Cas9基因编辑系统及其在制备治疗遗传性感音神经性聋的药物中的应用,所述的基因编辑系统包括特异性靶向Myo6～(C442Y)突变基因的gRNA以及SaCas9-KKH,并通过AAV-PHP.eB病毒载体递送,形成了有效的针对Myo6～(C442Y)的敲除系统。本发明通过Myo6～(WT/C442Y)小鼠模型实验,评价其对小鼠听力损失的影响,结果发现AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2系统能特异性地敲除Myo6～(WT/C442Y)小鼠中的Myo6～(C442Y)突变等位基因,且Myo6～(WT/C442Y)小鼠中注射AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2后可在长达5个月的时间内,观察到听觉功能的恢复,同时,还观察到ABR I波潜伏期变短、细胞存活率提高、纤毛形态变规则,直观地验证了AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2系统对Myo6～(C442Y)突变基因导致的半显性遗传感音神经性聋的治疗作用,可用于制备治疗半显性遗传感音神经性聋的药物。

本发明涉及生物技术领域,特别涉及一种融合成像基因及其慢病毒表达质粒、慢病毒和细胞,其制备方法和用途。融合成像基因包括生物发光成像基因、荧光蛋白基因和钙成像基因,三种基因之间通过连接基团连接。将融合基因插入改造后的慢病毒表达质粒,获得携带融合成像基因的慢病毒颗粒。慢病毒颗粒可用于不同类型细胞的感染,获得融合成像基因标记的细胞。经本发明中的融合成像基因标记的细胞,可以同步进行细胞的数量成像检测、形态成像检测以及钙活动功能成像检测,在细胞命运追踪方面具有重要用途。

本发明涉及涉及编码内皮抑素的核酸分子、包含该核酸分子的转基因表达盒以及包含该转基因表达盒的基因递送系统。本发明的转基因表达盒可用于治疗各种以新生血管为主要病理机制的视网膜疾病以及多种癌症。

本发明提供了抑制长链非编码RNA MALAT1表达的shRNA,其针对Genbank中MALAT1转录本序列NR-002847.3的286、743、1048、4807位点或其他转录本序列中的对应位点设计；本申请还提供了相应质粒、慢病毒、药物组合物及其在治疗认知障碍中的应用。本发明的MALAT1-shRNA干扰质粒能显著特异性抑制海马神经元内MALAT1的表达,促进神经元细胞周期的进程,抑制神经元凋亡和凋亡关键蛋白的表达,从而起到抵抗应激诱导的神经元细胞损伤的作用。

本发明属于神经工程技术领域,具体涉及一种在神经元细胞特异性高效表达的迷你启动子pAPP。本发明提供了一种迷你启动子pAPP及其应用,所述启动子pAPP的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明另一方面提供了应用该启动子pAPP在重组腺相关病毒载体、重组腺相关病毒、重组腺相关病毒的试剂盒、基因治疗载体中,以及在制备操控神经细胞、基因编辑和/或基因治疗试剂中的应用。本发明提供的迷你启动子pAPP使外源基因得以在全脑范围内的神经元中高效表达,在基因编辑和基因治疗领域具有广泛的应用前景。

本发明属于基因编辑技术领域,具体涉及一种CRISPR/Cas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为特定Cas9蛋白与sgRNA形成的复合体,能精确定位靶向DNA序列并产生切割,使所述靶序列发生双链断裂损伤；所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑。所述各Cas9蛋白均具有数量相对少的氨基酸,可与相同的sgRNA形成复合体进行基因编辑。进一步地,所述Sa-SchCas9蛋白和SchCas9蛋白识别的PAM序列非常简单,所述Sha2Cas9-HF1蛋白、Sha2Cas9-HF2蛋白、SpeCas9-HF1蛋白、SpeCas9-HF2蛋白和SpeCas9-HF3蛋白特异性非常高且编辑效率很高。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。