本发明公开了七种RNA病毒核酸检测质控品及其制备方法,属于临床检验学和应用分子生物学领域。本发明具有序列表SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列。本发明采用优化的MS2噬菌体病毒样颗粒包装技术,分别将七种RNA病毒的重组常规检测区域序列包裹至MS2衣壳蛋白中,制备了七种病毒的MS2病毒样颗粒核酸检测质控品。质控品充分模拟天然病毒粒子结构、性能稳定、耐核酸酶、无任何传染危险性,实现从核酸提取、逆转录及扩增检测的全流程的质量监控和评估。该质控品通用性好,检测区域广泛,适用于常规检测方法和多种检测试剂盒的质量控制,克服了不同试剂盒不能共用质控品的难题。

生物本发明涉及一种以罗汉果醇为底物生物合成罗汉果糖苷V的工程菌株的构建及其应用。由包含糖基转移酶基因的重组细胞,或包含糖基转移酶基因和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因的重组细胞转化底物罗汉果醇得到罗汉果糖苷V,所述的重组细胞表达葡萄糖糖基转移酶基因和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因,产UGT酶和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶。本发明通过基因重组技术引入外源物种UGT酶基因和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因,将其转化到基因工程菌中进行表达,重新构建了新的罗汉果糖苷V的生物合成路径,通过UGT酶基因和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因的过表达,实现了以罗汉果醇为底物生物合成罗汉果糖苷V,合成产量高。

一种酶法制备磷酸氟达拉滨的方法,以氟达拉滨为原料,在无机盐和辅酶存在的条件下,通过酶催化反应制备磷酸氟达拉滨;其中,酶催化反应所用的酶选自磷酸转移酶、醛酮还原酶、醇氧化酶或醇脱氢酶中的至少一种;酶催化反应的pH为7.3-7.6,反应温度为37℃,反应1-4 h；辅酶选用ATP。本发明通过采用一种新的酶法工艺制备磷酸氟达拉滨,解决了一些现有化学工艺中存在的技术问题,较现有的酶法制备的工艺也有所改善；降低了生产成本；工艺环保,反应条件温和。

本发明公开了一种基于群体感应的自诱导调控系统,包括luxI、luxR和egfp,其中,控制luxI和luxR表达的启动子选自P-(luxI)、P-(BB)或P-(J23100)；控制egfp表达的启动子选自P-(luxI)、P-(luxI)(T-38C)或P-(luxI)(C-77T)。所述的基于群体感应的自诱导调控系统在大肠杆菌工程菌的目的基因表达、自动调控中的应用,在制备褐藻胶裂解酶、酯酶中的应用。本发明还公开了包含该基于群体感应的自诱导调控系统的重组表达载体、重组工程菌。本发明对群体感应系统中的启动子进行改造筛选,构建了适合褐藻胶裂解酶和酯酶的自诱导调控系统,可实现褐藻胶裂解酶的高密度、高酶活发酵。

本发明公开了一种γ-环糊精葡萄糖基转移酶构建方法及应用,所述方法包括以下步骤：基因合成及重组菌构建：将来自Bacillus Clarkii的基因序列为模板设计引物,通过无缝克隆技术,以pET-28a为载体,构建基因工程菌株E.coliγ-CGT-hfut；酶蛋白表达：将构建好的工程菌株2％接种量接种于100μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,在37℃、220r/min条件下培养至OD600达到1.8—2.0后,加入终浓度为0.3mmol/L的IPTG诱导,于25℃、200r/min环境中表达培养8h,在4℃、8000r/min的条件下离心15min获得菌体,用0.05mol/L、pH为11的甘氨酸-氢氧化钠洗涤细胞,将重悬菌液于冰浴中超声破碎15min,最终在4℃、6000r/min的条件下离心15min获得粗酶液,即为所述γ-环糊精葡萄糖基转移酶。γ-环糊精葡萄糖基转移酶可以应用与以淀粉为底物,特异性制备高纯度的γ环糊精。

本发明提供了信号肽相关序列及其在蛋白质合成中的应用,具体地,本发明提供了具有提高蛋白表达效果的信号肽及其编码序列,将信号肽编码序列与外源蛋白的编码序列可操作的相连形成的核酸构建物,可显著提高外源蛋白合成的效率,并简化目标外源蛋白的表达与纯化过程。同时,本发明提供与其相应的载体或载体组合、基因工程细胞、试剂盒,从而能够应用于蛋白质合成中。

本发明提供了信号肽相关序列及其在蛋白质合成中的应用,具体地,本发明提供了具有提高蛋白表达效果的信号肽及其编码序列,将信号肽编码序列与外源蛋白的编码序列可操作的相连形成的核酸构建物,可显著提高外源蛋白合成的效率,并简化目标外源蛋白的表达与纯化过程。同时,本发明提供与其相应的载体或载体组合、基因工程细胞、试剂盒,从而能够应用于蛋白质合成中。

本发明提供了信号肽相关序列及其在蛋白质合成中的应用,具体地,本发明提供了具有提高蛋白表达效果的信号肽及其编码序列,将信号肽编码序列与外源蛋白的编码序列可操作的相连形成的核酸构建物,可显著提高外源蛋白合成的效率,并简化目标外源蛋白的表达与纯化过程。同时,本发明提供与其相应的载体或载体组合、基因工程细胞、试剂盒,从而能够应用于蛋白质合成中。

本发明提供了一种编码精氨酸脱亚胺酶的DNA分子,其包含如SEQ IDNO：1所示的核苷酸序列。本发明还提供了一种包含本发明所述的DNA分子的表达载体和用于表达精氨酸脱亚胺酶的基因工程菌。本发明还提供了一种使用本发明的工程菌制备L-瓜氨酸的方法。本发明提供的基因工程菌具有很高的催化精氨酸生成L-瓜氨酸的能力,极大地提高了表达效率,从而降低了生产和使用成本。

本发明提供一种易错PCR技术及高通量筛选提高葡萄糖基转移酶EUGT11酶活的方法,包括以下步骤：a.EUGT11易错PCR扩增;b.易错PCR突变体库构建;c.高通量筛选酶活提高突变菌株；d.高酶活突变菌株序列分析。实现对大肠杆菌表达的葡萄糖基转移酶EUGT11基因进行定向进化,筛选得到提高葡萄糖基转移酶EUGT11酶活及可溶表达量的关键碱基突变位点。