发酵生产嘌呤核苷的重组菌及其构建方法与应用。本发明涉及微生物发酵领域,具体涉及生产嘌呤核苷的重组菌及其构建方法与应用。所述产嘌呤核苷的重组菌相比于出发菌具有突变的嘌呤操纵子调控区、失活的醛糖转移酶、增强的6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性和弱化的6-磷酸葡萄糖异构酶。本发明提供的重组菌肌苷产量显著提高。本发明开辟了新的提高嘌呤核苷的发酵产量的方法,从而在实践上可用于细菌发酵生产肌苷、鸟苷和腺苷。

本发明属于烟草基因工程领域,具体涉及一种降低烟叶总蛋白及烟气苯酚含量的调控基因烟草番茄红素ε-环化酶基因Ntε-LCY2,该基因碱基序列如SEQ ID NO.1所示。烟草番茄红素ε-环化酶Ntε-LCY2由498个氨基酸残基组成,其中第105-287和290-475位氨基酸是保守的转运蛋白结构域。该蛋白与植物叶片中总蛋白质含量相关,降低该基因表达后,叶片中总蛋白质含量明显降低。本发明通过对特定Ntε-LCY2的初步研究,发现其与烟草总蛋白质含量高度相关,在将该基因突变后,烟草中总蛋白质含量明显降低。基于这一特性,可为低苯酚含量烟草新品种培育提供一定的应用基础和参考借鉴。

本发明涉及基因工程领域,具体涉及用于提高植酸酶在毕赤酵母中的分泌表达的分子伴侣表达载体、菌株。所述表达载体包括串联的分子伴侣基因BIP和PDI,或者串联的分子伴侣基因VHB和PDI,或者串联的分子伴侣基因HACI和PDI。将经基因工程改造筛选得到的包含上述表达载体的耐高温植酸酶高酶活表达菌株V28-VTR-001,50L发酵总酶活达到37239U/mL的重组毕赤酵母。

本发明涉及植物病害防治技术领域,具体而言,涉及基因GhSINAs在防治棉花黄萎病中的应用。本发明提供了基因GhSINAs在防治棉花黄萎病中的应用,所述基因GhSINAs包括基因GhSINA7、基因GhSINA8和基因GhSINA9中的任一种或多种；基因GhSINA7的核酸序列如SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2所示；基因GhSINA8的核酸序列如SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4所示；基因GhSINA9的核酸序列如SEQ IDNO:5和/或SEQ ID NO:6所示。本发明在研究中发现,这三个基因中,每个超表达转基因株系都提高了对黄萎病的抗性,然而每个基因的沉默都抑制了对病原体感染的防御能力,表明GhSINA7、GhSINA8和GhSINA9在棉花防御黄萎病菌中起到正向调控作用。

本发明提供了一种产D-塔格糖的基因工程菌及其构建方法和应用,属于生物工程技术领域；本发明中,利用基因工程的手段,在E.coli BL21的基础上构建了联合表达L-阿拉伯糖异构酶(L-AI)和β-半乳糖苷酶(β-gal)的基因工程菌,并将该基因工程菌用于转化乳清粉制备D-塔格糖,D-塔格糖的产量达到70～120g/L。

本发明公开了一种热稳定性提高的甘露糖异构酶突变体,属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了来源于微生物Deltaproteobacteria bacterium的甘露糖异构酶作为亲本,利用基因突变技术,第37位的精氨酸替换成赖氨酸和第164位的甘氨酸替换成亮氨酸,得到双突变体R37K/G164L。在温度为60℃时,测得野生酶的半衰期为46.27min,突变体酶R37K/G164L的半衰期为185.83min,两点突变体R37K/G164L在60℃的半衰期为野生酶半衰期的4倍,突变体酶相对于野生酶热稳定性明显的提高。这一发现对于研究更多热稳定性甘露糖异构酶具有重要的研究价值。

本发明涉及生物技术领域,尤其涉及酶组合物及其在柚皮素生物合成中的应用。本发明通过研究查尔酮合成酶CHSs与查尔酮异构酶样蛋白CHILs之间相互作用的关系,获得能够有效促进柚皮素的酶组合物。该组合物以对香豆酸为底物,合成柚皮素水平可达187.10mg/L,较无CHIL情况下,柚皮素产量提高了25.95％。同时,脱轨产物CTAL的含量降低了69.80％。该组合对于推动柚皮素产物的工业化生产具有重要意义,也为CHS催化的其他黄酮产物的高效合成奠定了基础。

本发明涉及一株缩短发酵周期的产酪醇重组大肠杆菌及其应用,属于发酵工程技术领域。其公开了一株缩短发酵周期的产酪醇重组大肠杆菌YC166,已保藏于中国典型培养物保藏中心,分类命名为大肠杆菌YC166(Escherichia coli YC166),保藏日期2021年4月12日,保藏编号CCTCC NO：M2021358。将该菌株应用于酪醇的摇瓶发酵或发酵罐发酵获取。本发明提供的菌株发酵水平与现有技术公开的产酪醇菌株相当,但发酵速度显著高于现有技术的同类型菌株。

本发明提供了一种植物细胞分裂素狭霉素的生物合成基因簇及其生物材料以及在合成狭霉素中的应用,所述基因簇的核苷酸序列为SEQ ID NO:1中所示第255～8993位序列,以及SEQ ID NO:2中所示第91～8961位序列,共包含9个基因,其中agmA,agmB,agmC,agmD,agmE和agmF是狭霉素生物合成过程中的必须基因,agmT1和agmT2是编码转运蛋白的基因,agmR为调控基因。本发明提供了狭霉素生物合成基因簇及相关蛋白信息,揭示了核苷类抗生素狭霉素的生物合成机制,为进一步遗传改造提供了材料和方法。本发明所提供的基因及其编码的蛋白也可以用来体外合成狭霉素。

本发明属于微生物发酵技术领域,具体涉及一种微生物发酵法制备D-丙氨酸的方法。本发明首先构建一株生产D-丙氨酸的基因工程菌,所述工程菌以谷氨酸棒杆菌ATCC 13032为出发菌株,通过敲除丙氨酸消旋酶基因alr和L-丙氨酸转氨酶alaT；过表达meso-二氨基庚二酸脱氢酶编码基因；敲除iolR阻遏蛋白基因同时基因组整合表达葡萄糖激酶基因glk1；整合来自大肠杆菌的edd和eda基因获得。该菌株以葡萄糖为底物直接发酵法生产D-型氨基酸,成本低,技术简单,5L发酵罐中D-丙氨酸产量能够达到50-60g/L。另外,发酵法高效合成D-型氨基酸属于开创性研究,借此方法,可以对发酵法进行无限扩展,低成本、高效率合成多种D-型氨基酸。