本发明属于生物医药技术领域,公开了一种用于药物代谢研究的CYP酶人源化大鼠动物模型的构建方法及其应用。所述构建方法包括基因型鉴定,人源基因表达鉴定,人源基因功能验证。本发明首先利用CRISPR系统进行CYP酶人源化大鼠的构建,包括基因编辑靶点的选择、sgRNA与Cas9 mRNA的体外合成与转录、同源重组模板构建、假孕母鼠的制备、单细胞胚胎的体外显微注射与移植、大鼠的繁殖,最后得到纯合子CYP基因人源化大鼠。然后对纯合子人源化大鼠从蛋白水平进行CYP酶表达检测,以及进行其代谢功能验证,以证明该CYP人源化大鼠构建成功。本发明构建的CYP1A2人源化大鼠具有和人更相似的代谢特征,消除了大鼠与人之间CYP1A2介导药物代谢的种属差异,为CYP介导的药物代谢研究提供了新的大鼠动物模型。

本申请提供一种自动化显微注射方法、装置、系统、设备及存储介质,涉及自动化技术领域。该方法可包括：获取待注射的图像中第一目标注射对象的图像,待注射的图像为图像采集设备采集的培养皿中的多个注射对象的图像,第一目标注射对象为待注射的图像中的起始注射对象；对第一目标注射对象的图像进行图像处理,得到处理后的第一目标注射对象的图像；根据处理后的第一目标注射对象的图像,确定第一目标注射对象中的第一目标注射靶位；控制注射器对第一目标注射靶位进行注射。本方法可实现自动化的注射操作,提高了注射效率和注射精确度。

本发明涉及基因工程技术领域,具体公开了一种基于CRISPR/Cas9技术获取Period基因突变位点的方法及用途,通过sgRNA模板的合成和体外转录,每粒卵显微注射sgRNA/Cas9蛋白,显微注射后G0代突变检测突变的发生情况。本发明的方法成功发现了2个可用于敲除Period基因的靶标位点,对于Period在斜纹夜蛾体内的功能分析奠定了基础。

本发明涉及一个家蚕卵滞育的必需基因Bmtret1及其应用,属于家蚕技术研究领域。本发明通过靶向家蚕Bmtret1基因,降低其表达量,或者破坏Bmtret1基因结构,可以使本应进入滞育的蚕卵转变为非滞育卵。这一发明可以用于在蚕业生产中培育滞育性可调节的家蚕材料和品种,同时为通过调控鳞翅目昆虫的卵滞育实现害虫防治提供一种新的思路。

本发明公开了一种适于翘嘴鲌受精卵Mstn基因敲除的方法及应用,属于基因编辑技术领域,包括将敲除试剂使用显微注射的方法注入翘嘴鲌受精卵胚胎中,获得Mstn基因缺失型翘嘴鲌模型,上述敲除试剂包括sgRNA、Cas9蛋白和酚红指示剂,其中sgRNA的序列如SEQ IDNO.1所示。本发明采用RNP形式通过显微注射直接递送Cas9蛋白和sgRNA到翘嘴鲌的受精卵中,提高了基因编辑效率。显微注射法能够绕过细胞外基质、细胞膜及细胞质等多层屏障,以最直接的方式将sgRNA和Cas9蛋白精确递送到细胞核或细胞质中,因此可以实现对基因编辑的高度控制进而大幅度降低脱靶效应。