本发明公开了一种表达小鼠p53a或p53b蛋白质粒及其构建方法和应用,该构建方法包括：提取小鼠组织中的RNA,并反转录为cDNA；以cDNA为模板对表达p53a和p53b蛋白的基因分别进行PCR扩增；将表达p53a蛋白的基因片段、表达p53b蛋白的基因片段以及pCMV-HA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,回收酶切产物,连接、转化大肠杆菌,提取重组质粒；酶切鉴定和测序正确的重组质粒进行转染扩增,提取质粒；该构建方法具有快速、准确、高效的特点。

本发明公开了一种Nluc标记的重组猪δ冠状病毒感染性克隆质粒构建及其应用,针对猪δ冠状病毒,采用BAC系统和CRISPR/Cas9技术相结合的方式,基于已构建成功的PDCoV感染性克隆质粒,先通过CRISPR/Cas9切割PDCoV感染性克隆质粒,再通过同源重组方式获得Nluc基因替换NS6基因的重组质粒,转染细胞后拯救出稳定表达Nluc的重组病毒,通过药物实验证实该重组病毒可为抗猪δ冠状病毒药物的筛选研究提供非常有价值的技术工具。

本发明涉及基因敲入技术领域,公开了一种应用于钙离子成像的斑马鱼心脏特异标记品系的构建方法。该方法使用了CRISPR/Cas9基因编辑技术,将编码钙离子浓度指示剂的GCaMP5G蛋白的基因编码序列敲入野生型斑马鱼myl7基因的7号外显子内。方法内容包括：确定将GCaMP5G基因序列敲入斑马鱼myl7基因的7号外显子的特异性靶位点以及相应sgRNA的合成,GCaMP5G基因敲入斑马鱼myl7特异位点的序列合成,GCaMP5G基因敲入斑马鱼品系筛选与鉴定。myl7基因的打靶序列如CRISPR/Cas9打靶系统的流程图所示,GCaMP5G蛋白的基因编码序列如图1所示。本发明的斑马鱼品系有助于钙离子成像观察心脏形态发生的整个过程以及心脏收缩和舒张时引起的钙流变化,可以广泛用于心脏疾病的病理研究,并对药物筛选的体外验证提供了良好的基础。

本发明公开了一种用于双靶标基因编辑的CRISPR/Cas9系统及其在构建抑郁症猪核移植供体细胞中的应用。一种用于猪BDNF和SLC6A4基因编辑的CRISPR/Cas9系统,包含Cas9表达载体、针对猪BDNF基因的gRNA表达载体以及针对猪SLC6A4基因的gRNA表达载体；所述的Cas9表达载体质粒全序列如SEQID NO.2所示。采用本发明筛选的gRNA联合改造的Cas9高效表达载体进行基因编辑,编辑效率比原载体有了显著的提高。

本发明涉及基因工程领域,特别是涉及一种双途径拮抗PCSK9的重组基因、载体、外泌体及制备方法和应用。本发明提供了一种双途径拮抗PCSK9的重组基因,所述重组基因从3’端至5’端包括依次连接Kozak片段、CD63第一片段(N-CD63)、outer-EGF-A片段、CD63第二片段(C-CD63)、inner-EGF-A片段和FLAG标签。本发明所述重组基因能够有效治疗高脂血症和动脉粥样硬化,而且具有副作用小、成本低、稳定性高、拮抗效率高的优势。

本发明公开了一种牙鲆SOCS3基因及其真核表达载体、表达系统和异源表达方法。所述牙鲆SOCS3基因的核酸序列如SEQIDNO.1所示。扩增所述牙鲆SOCS3基因的上游引物如SEQIDNO.2所示,下游引物如SEQIDNO.3所示。本申请在成功克隆牙鲆SOCS3基因的基础上,进一步构建了牙鲆SOCS3基因的真核表达载体pEGFP-C1-PoSOCS3,并将其成功转染HEK293T细胞中,荧光倒置显微镜观察牙鲆SOCS3基因在细胞中的亚细胞定位,为后续的牙鲆SOCS3功能研究提供了基础资料。

本发明公开了一种用药物莨菪亭建立的转基因鱼(mbp:egfp)脱髓鞘疾病模型的构建方法,所述方法是将转基因鱼(mbp:egfp)置于18.5ug/ml莨菪亭溶液中,3-6天即完成斑马鱼模型的构建。本发明通过结合基因,环境和老化等多种因素,可快速构建斑马鱼脱髓鞘疾病模型,为脱髓鞘疾病的机制和治疗方法提供基础。

本发明公开了基于Cre-FloxP系统的CNN3基因敲除小鼠模型的构建方法,方法包括：在CNN3基因的第二外显子的两边分别插入FloxP基因片段,构建Cas9/gRNA靶点并构建同源重组模板,将同源重组模板与所述供体DNA一起显微注射到小鼠的受精卵中得到创始Cnn3-FloxP小鼠,并与雌鼠进行交配后自交,得到稳定遗传的纯合子CNN3～(fl/fl)小鼠；将所述纯合子CNN3～(fl/fl)小鼠与组织特异性表达的Cre小鼠交配后进行自交,经基因鉴定筛选出基因型为Cre～(+/-)/CNN3～(fl/fl)小鼠。本发明设计基因技术领域,可高效构建得到特异性组织或特异性细胞CNN3基因敲除的小鼠,大幅提高了选择性敲除CNN3小鼠模型的构建效率及构建成功率。

本发明公开了一种长链RNA LncPRDM16及其检测试剂、方法与应用,属于分子生物学技术领域,其中长链RNA LncPRDM16基因的转录本序列如序列表SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。本发明扩增得到了长链RNA LncPRDM16的新的全长转录本,并首次验证了所述长链RNA LncPRDM16与鸡前脂肪细胞增殖能力相关,通过所述LncPRDM16过表达发现其可显著抑制鸡前脂肪细胞增殖,因此能够作为预测、辅助预测和调控鸡前脂肪细胞增殖的分子标志物,对低脂肉鸡的选育具有重要应用价值。

本发明属于病毒基因工程技术领域,具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn-nsp1α-G90A,并进一步公开其应用。本发明所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn-nsp1α-G90A,通过将高致病性的PRRSV毒株JXwn06非结构蛋白nsp1α的第90位氨基酸由甘氨酸突变为丙氨酸获得突变病毒,获取了诱导降解其靶细胞-猪肺泡巨噬细胞(PAMs)PAMs细胞表面SLA-I分子功能受损的突变毒株。该突变病毒感染宿主细胞后,可诱导降解靶细胞表面SLA-I分子的功能严重受损,且该突变病毒遗传性质表现稳定,可作为猪繁殖与呼吸综合征的疫苗侯选株,用于预防猪繁殖与呼吸综合征,具有良好的应用前景。