本发明公开了一种alpha-L-鼠李糖苷酶、其制备方法及应用。具体涉及一种新型alpha-L-鼠李糖苷酶的氨基酸序列、编码上述氨基酸序列的核苷酸序列、含有上述核苷酸序列的重组载体和重组宿主、利用上述重组宿主制备alpha-L-鼠李糖苷酶的方法以及所述alpha-L-鼠李糖苷酶在宝霍苷I生产中的应用。本发明所提供的alpha-L-鼠李糖苷酶具有催化效率高、热稳定性好、特异性高等优点。朝藿定C经葡萄糖苷酶快速催化水解后,再利用本发明中所提供的alpha-L-鼠李糖苷酶进一步催化水解其C-(3)位置外侧鼠李糖苷键生成宝霍苷I,底物转化率高达99.5%、转化效率高、无副产物、步骤简单、反应时间短、污染小、适合工业化生产。

本发明公开了一种α-L-鼠李糖苷酶、其制备方法和应用,属于基因工程和生物催化领域。具体涉及一种新型α-L-鼠李糖苷酶氨基酸序列和编码基因、含有上述基因的重组载体和重组微生物、利用上述重组微生物发酵制备α-L-鼠李糖苷酶的方法以及所述α-L-鼠李糖苷酶在水解薯蓣皂苷制备薯蓣皂素中的应用。本发明提供的α-L-鼠李糖苷酶可以特异性水解植物黄姜中甾体皂苷C-(3)位置外侧α-L-1,2-鼠李糖苷键,具有催化效率高、热稳定性好、糖耐受性高等优点。此外,在所述α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶的共催化下,黄姜粗提物中的甾体皂苷几乎完全转化为薯蓣皂素,转化率高达98.5%,表明其在规模化皂素生产中具有良好的应用前景。

本发明涉及一种聚酮合酶及其在制备红粉苔酸中的应用,属于微生物化学技术领域。本发明首次从光黑壳属真菌中克隆到与红粉苔酸合成相关的聚酮合酶PreuA,并基于酿酒酵母异源表达技术,构建了可高效生产红粉苔酸的酵母突变株；并以制备的红粉苔酸为对象,研究了其对七种农作物病原真菌的抑制活性。研究发现,红粉苔酸对苹果轮纹病菌、玉米小斑病菌、马铃薯黄萎病菌、油菜菌核菌四种农作物病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对苹果轮纹病菌有很强的拮抗作用(MIC,25μg/mL)。通过本发明极大地丰富了红粉苔酸的生产来源,对于拓展其衍生化途径,研发新型生物农药有重要的科学价值和应用前景。

本发明涉及一种可以在毕赤酵母高效分泌的单加氧酶突变体及应用,该单加氧酶突变体是将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列自N端第1位至X位氨基酸残基替换为SEQ ID No.2所示氨基酸序列第1位至X位氨基酸残基所形成的蛋白质,其中X为125-135的整数；并在所形成如SEQ ID No.3的氨基酸序列的基础上,对一个或多个氨基酸残基发生突变得到多个性能更佳的单加氧酶突变体。本发明的单加氧酶突变体能在毕赤酵母中高效分泌表达,可直接使用发酵上清液作为酶促反应的催化剂,与大肠杆菌胞内重组表达的单加氧酶相比,本发明的单加氧酶获取简单,蛋白纯度高,避免了常规制备胞内酶的细胞破碎过程,并简化了下游分离提取过程,具有良好的工业应用前景。

本发明涉及基因工程技术领域,具体公开了一种苹果离子转运体MdCCX2,所述MdCCX2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用MdCCX2进行转基因获得高耐盐性的转基因植株,MdCCX2的过表达能降低盐胁迫下转基因植株的钠含量,提高转基因植株的抗氧化酶活性,从而提高植物耐盐性。

本发明涉及一种果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体、基因工程菌及构建方法和蛋白表达方法,属于蛋白表达技术领域。本发明所述果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体包括骨架载体和编码果糖胺脱糖酶的基因；所述编码果糖胺脱糖酶的基因的核苷酸如SEQIDNO.1所示。本发明所述载体有利于该酶的工业化生产,生产方法绿色,安全,环保,无污染,可控,对氨基葡萄糖的大规模制备有益,会产生较大的社会价值和经济效益。

本发明公开了一种微生物基因表达命运共同体及其构建方法和应用,所述微生物基因表达命运共同体至少包括细胞必需基因和编码产物合成途径相关的基因,必需基因与产物合成途径相关基因共表达,可实现生物细胞与产物生死与共,实现了产品的稳定生产,提高了生产效率。通过将微生物必需基因与编码产物合成路径的基因串联表达,减小了微生物对环境变化的抗逆性,实现了更稳定的目的基因表达,使得生物制造的限制性和制约条件降低,更有利于以后的放大生产和提高产品的产率。该方法将在生物制造和生物工业技术方面发挥重要作用,大幅度降低产品的制造成本。

本发明涉及一种日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子及其应用。本发明成功克隆了日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子序列,并成功构建了日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子pGL3-Cathelicidin2-pro荧光素酶报告质粒。实验证明日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子可被革兰氏阴性菌重要表面抗原LPS以及嗜水气单胞菌诱导激活。日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子的克隆及其强启动子活性的诱导表达分析,为研究日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因的表达调控机制、鱼类抵御病原菌感染的天然免疫应答机制、特别是重要的鱼类炎症相关NF-κB和MAPK信号通路网络调控机制的研究提供良好的实验系统,为利用该启动子构建表达载体高效表达外源基因或将该启动子应用于转基因鱼构建创造条件。

本发明公开了一种毕赤酵母来源的生长依赖型启动子及其应用。所述生长依赖型启动子是所述的核苷酸序列中的任意一个：(I)SEQ ID No.1,编码某未知功能蛋白表达启动子的核苷酸序列；(II)SEQ ID No.2,编码热激蛋白9/12家族表达启动子的核苷酸序列。本发明中提供的生长依赖型启动子能够驱动目标基因的表达,且其表达强度伴随着毕赤酵母从生长迟缓期、对数生长期至稳定期逐渐升高。利用其构建的表达载体可以在毕赤酵母中实现各种不同目标基因的高效表达,因此,该启动子在重组蛋白表达领域具有广泛的应用前景。

本发明公开了一种能降解玉米赤霉烯酮的水解酶的突变体构建方法及其应用,属于生物技术和基因工程技术。本发明提供的玉米赤霉烯酮水解酶突变体相对于未突变的水解酶具有相似或较高的催化活性,对于玉米赤霉烯酮的降解率显著提高。本发明将获得的玉米赤霉烯酮水解酶突变体在食品级酵母菌乳酸克鲁维酵母中实现了酶的分泌表达,表达产物具有食品级安全性,适合在食品和饲料等行业中应用。