本发明公开了一种CRISPR/Cpf1基因编辑系统及其构建方法和在赤霉菌中的应用,该系统为骨架质粒pCpf1Ff-DR,包括Fncpf1基因、功能性crRNA基因、启动子pGPD、启动子pTRPC、强RNA聚合酶III型启动子5srRNA、潮霉素筛选标记hph。本发明系统效率高、通用性强、易于操作而被迅速应用于丝状真菌赤霉菌中,通过该基因编辑系统可用于赤霉菌中实现长达17kb的比卡菌素基因簇的敲除。本发明首次在赤霉菌中实现大片段基因敲除,且首次发现比卡菌素基因簇敲除有利于提高赤霉素产量,该方法有望进一步用于改造赤霉素工业菌,缩短菌株升级的时间,为提高赤霉素产量、增加经济效益提供了强有力保障。

本发明提供了金属离子诱导的米曲霉基因启动子、其制备方法及应用。米曲霉金属离子诱导基因启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。该启动子受锌、锰离子诱导表达。在锌、锰离子诱导浓度下,它们对米曲霉无生长抑制,反而促进米曲霉生长。而且诱导物ZnSO-(4)和MnSO-(4)价格低廉,有利于在工业生产中广泛使用。

本发明公开了一种新型α-L-鼠李糖苷酶及其制备方法和应用,属于基因工程和生物催化领域。具体涉及一种新型的α-L-鼠李糖苷酶及其氨基酸序列、编码上述氨基酸序列的核苷酸序列、含有上述核苷酸序列的重组载体和重组细胞、利用上述重组细胞制备α-L-鼠李糖苷酶的方法以及上述α-L-鼠李糖苷酶在阿可拉定生产中的应用。本发明所提供的α-L-鼠李糖苷酶可以高效逐步水解断裂朝藿定C外侧和内侧鼠李糖苷键。在α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶的共同催化下,底物朝藿定C几乎全部转化为阿可拉定,转化率高达99%以上、无副产物、步骤简单、反应时间短、且污染小。

本发明提供了一类5-11双环二倍半萜骨架化合物及其制备,Nigtetraene的结构式如下所示,其合成酶NnNS的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,合成基因为从CS12199菌株(Nectria.nigrescens 12199)基因组中克隆得到,多核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。NnNS蛋白具有催化底物链长延伸和结构环化的功能,能够辅助Nigtetraene类化合物母核合成。本发明为5-11双环二倍半萜化合物的生物合成提供了新的资源,为该类化合物种类的合成提供一种选择。

本发明公开了一种微生物基因表达命运共同体及其构建方法和应用,所述微生物基因表达命运共同体至少包括细胞必需基因和编码产物合成途径相关的基因,必需基因与产物合成途径相关基因共表达,可实现生物细胞与产物生死与共,实现了产品的稳定生产,提高了生产效率。通过将微生物必需基因与编码产物合成路径的基因串联表达,减小了微生物对环境变化的抗逆性,实现了更稳定的目的基因表达,使得生物制造的限制性和制约条件降低,更有利于以后的放大生产和提高产品的产率。该方法将在生物制造和生物工业技术方面发挥重要作用,大幅度降低产品的制造成本。

本发明公开了一种天麻谷氨酰胺合成酶(GS)基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；编码342个氨基酸残基；构建天麻GS基因的原核表达载体,原核表达分析表明本发明天麻谷氨酰胺合成酶基因为可溶性蛋白,其分子量约为59.94kDa；本发明构建了天麻谷氨酰胺合成酶基因的真核过表达载体,通过农杆菌法转染天麻共生菌蜜环菌,获得转天麻谷氨酰胺合成酶基因的蜜环菌,将转GS基因工程蜜环菌在13℃和28℃下培养,长势比野生型蜜环菌好且生长快速,因此本发明天麻谷氨酰胺合成酶基因有助于缩短蜜环菌的培养时间和提高蜜环菌的抗寒性和抗高温生长,本发明为增强天麻的抗冷性,扩大天麻种植分布范围,增强天麻氮代谢能力及提高天麻产量提供实验基础。

本发明属于植物分子生物学领域,具体涉及一个抑制核盘菌的Os-miR169y及其应用。Os-miR169y成熟miRNA序列如SEQ ID No.1所示,其人工合成的前体核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明的Os-miR169y可靶向核盘菌SsRPL19基因,Os-miR169y在核盘菌中的超量表达显著抑制了菌丝生长,降低了菌丝致病力,并导致菌核形成时间延后,Os-miR169y在拟南芥中的超量表达,有效减小了发病面积,提高了拟南芥的菌核病抗性,在提高寄主植物菌核病抗性方面具有良好的应用前景。

本发明公开了一种N-糖基化修饰提高黑曲霉木聚糖酶热稳定性的方法,属于基因工程技术领域。通过酶学性质测定,突变体酶T59N的半衰期t-(1/2)～(50℃)提高至340min,突变体酶A55N/D57S/T59N在50℃下孵育500min,酶活没有下降趋势,孵育1260min,酶活只损失25.6％。突变体酶A55N/D57S/T59N的比酶活为290.5U/mg,较xynA提高了70.4％,且在pH2.0-9.0间很稳定,孵育1h仍能保持70％以上的酶活力,具有广阔的应用前景。

本发明属于食品技术领域,公开了一种利用TORC1关键基因突变株靶向识别蛋白食品中特殊氨基酸产生的方法,本发明通过对18种氨基酸添加对尖孢镰孢菌野生株、Gtr1、Gtr2、Sch9与Tap42基因敲除突变及回补株的菌落生长、产孢、产T-2的调控作用,深度阐述氨基酸对镰孢菌TORC1通路介导下的生长和代谢的调控作用。由上述研究表明,可以通过本发明上述方法初步鉴别样品中所含有的氨基酸种类,从而为鉴别食品中氨基酸种类提供新方法,新思路。

本发明属于生物技术领域,具体涉及一种通过超表达香菇TLP基因提高香菇对深绿木霉抗性的方法及应用。本发明以强抗菌株Y3334cDNA为模板扩增LeTLP1基因全长片,将线性化载体pCAMBIA1300-g、Legpd启动子和LeTLP1基因全长片段通过重组酶连接,构建香菇LeTLP1基因过表达载体,获得超表达转化子,研究了LeTLP1基因过表达对香菇的深绿木霉抗性的影响,结果发现超表达LeTLP1基因能加强弱抗香菇菌株对深绿木霉的抗性,因此可以通过超表达LeTLP1基因的方法加强香菇菌株对木霉的抗性。