本发明公开了一种YH66-RS03880基因改造得到的工程菌及其在制备缬氨酸中的应用。本发明提供了YH66-RS03880～(G160A)蛋白,是将YH66-RS03880蛋白的第54位氨基酸残基由E突变为其他氨基酸残基得到的。本发明发现YH66-RS03880蛋白对细菌的缬氨酸产量存在正调控,即YH66-RS03880蛋白含量增高、缬氨酸产量增高,YH66-RS03880蛋白含量降低、缬氨酸产量降低。抑制YH66-RS03880基因表达可以降低缬氨酸产量,过表达YH66-RS03880基因提高缬氨酸产量。进一步的,本发明通过点突变,得到了YH66-RS03880～(G160A)蛋白,其功能优于YH66-RS03880蛋白。本发明对于缬氨酸工业化生产,具有重大的应用价值。

本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子、其质粒载体及其应用,谷氨酸棒杆菌高强度乙醇诱导启动子,其基因序列如SEQ ID NO.5所示。本发明使用启动子P-(A368)构建蛋白表达载体,并通过在培养基中添加乙醇,实现重组蛋白在谷氨酸棒杆菌二次生长阶段的高水平表达,克服了现有启动子强度低、诱导物渗透性且昂贵等不足,相比于现有的谷氨酸棒杆菌强启动子P-(H36),本发明启动子P-(A368)调控下的绿色荧光蛋白表达水平提高了2.43倍,同时在分泌重组蛋白VHH及XynA时可以实现更高的表达水平。

提供了包含突变的LysE的微生物和使用该微生物生产L-氨基酸的方法。与野生型LysE相比,突变的LysE具有改善输出和/或生产L-氨基酸的能力的作用。

本发明公开了一种转谷氨酰胺酶的高效制备方法及其专用工程菌。本发明提供了一种蛋白质,为序列表的序列2所示的蛋白质。本发明还保护将表达所述蛋白质的DNA分子导入谷氨酸棒状杆菌得到的重组微生物。所述重组微生物可用于制备转谷氨酰胺酶。本发明将来源于茂源链霉菌的MTG在T7启动子下进行表达,并在MTG的pro区与成熟区之间插入ΔICM内含肽成功实现了MTG在谷氨酸棒杆菌中的高效表达,发酵所得菌体经超声破碎后,无需蛋白酶处理或者其他条件改变,即可得到具有生物活性的MTG。本发明可用于制备转谷氨酰胺酶,进而应用于组织工程、纺织品和皮革加工等领域,具有应用推广价值。

本发明公开了一种高效生产转谷氨酰胺酶的方法及其专用工程菌。本发明提供了一种蛋白质,为序列表的序列2所示的蛋白质。本发明还保护将表达所述蛋白质的DNA分子导入谷氨酸棒状杆菌得到的重组微生物。所述重组微生物可用于制备转谷氨酰胺酶。本发明将来源于茂源链霉菌的MTG在T7启动子下进行表达,并在MTG的pro区与成熟区之间插入内含肽ssp-dnaB成功实现了MTG在谷氨酸棒杆菌中的高效表达,发酵所得菌体经超声破碎后,无需蛋白酶处理或者其他条件改变,即可得到具有生物活性的MTG。本发明可用于制备转谷氨酰胺酶,进而应用于组织工程、纺织品和皮革加工等领域,具有应用推广价值。

本发明公开了一种适用于谷氨酸棒杆菌的高强度启动子及应用,属于生物工程技术领域。本发明从谷氨酸棒杆菌中筛选获得了18个可提高蛋白表达强度的启动子。本发明筛选获得的启动子可导入至生产氨基酸的微生物中,经证实,在谷氨酸棒杆菌中,该启动子可强化基因的表达量,使其涉及的目标产物产量提高2～10倍甚至更高,具有重要的工业化应用价值。

本发明公开了一种生物合成2-苯乙醇的谷氨酸棒杆菌、构建方法及应用,构建方法包括,敲除所述受体菌的cg0641基因或抑制所述cg0641基因的表达或抑制所述cg0641基因编码的蛋白质的活性,获得突变株PE1；增加所述突变株PE1中酮酸脱羧酶编码基因编码蛋白质的表达量或增强所述酮酸脱羧酶编码基因编码蛋白质的活性,获得突变株PE2；增加所述突变株PE2中酪氨酸转氨酶编码基因和醇脱氢酶编码基因编码蛋白质的表达量或增强转氨酶基因和醇脱氢酶编码基因编码蛋白质的活性,获得突变株PE3。本发明所构建的高产2-苯乙醇的谷氨酸棒杆菌安全,且克服了现有的菌株生产效率低、耐受性缺陷等缺点,该菌株可以利用葡萄糖和秸秆水解液好氧发酵生产2-苯乙醇,发酵产量达到5.3g/L。

本发明公开了一种谷氨酸外排蛋白突变体及其应用。本发明通过定向进化的方法获得了谷氨酸外排能力提高的外排突变体,并提供了一种生产L-谷氨酸的方法,包括如下步骤：在受体菌中表达所述谷氨酸外排蛋白突变体,得到重组菌；对所述重组菌进行发酵培养,从发酵液中获得谷氨酸。本发明为丰富谷氨酸外排的理解及提高生产中谷氨酸的产量奠定了基础。

本发明公开了一种构建依克多因生产菌的方法,构建的基因工程菌CGMCC No.22733能够以葡萄糖为碳源,通过发酵直接生产依克多因,5L发酵罐发酵48小时,可产依克多因42.7g/L,具有开发和应用潜力。

本申请提供了用于精细化学品的改进生产的重组微生物,以及重组核酸分子、重组微生物和生产丙氨酸的方法。还提供了所述重组核酸分子或重组微生物发酵生产丙氨酸的用途。