本发明涉及重组菌株技术领域,特别涉及ICCG表达元件及表达载体、枯草芽孢杆菌重组菌株和降解PET或其单体的方法。该表达元件包括信号肽、ICCG基因、疏水模块。本发明枯草芽孢杆菌重组菌株通过信号肽、ICCG和疏水模块组装在一起,可以有效提高降解酶的分泌量和与底物的接触能力,从而提高降解PET的效率；本发明通过筛选不同的信号肽、疏水模块,获得了能够有效降解PET或其单体的重组枯草芽孢杆菌；本发明将耐高温降解酶应用于常温降解体系中,获得了能够常温条件下高效降解PET的重组菌株。

发酵生产嘌呤核苷的重组菌及其构建方法与应用。本发明涉及微生物发酵领域,具体涉及生产嘌呤核苷的重组菌及其构建方法与应用。所述产嘌呤核苷的重组菌相比于出发菌具有突变的嘌呤操纵子调控区、失活的醛糖转移酶、增强的6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性和弱化的6-磷酸葡萄糖异构酶。本发明提供的重组菌肌苷产量显著提高。本发明开辟了新的提高嘌呤核苷的发酵产量的方法,从而在实践上可用于细菌发酵生产肌苷、鸟苷和腺苷。

本发明涉及药物合成及酶工程技术领域,尤其是一种重组枯草芽孢杆菌及制备的转氨酶和应用,其中,将如SEQ ID NO：1所示的生物酶基因连接到pHT43质粒的BamHI和ZraI位点,然后转化到Bacillus subtilisATCC6633中进行表达,即得重组枯草芽孢杆菌。采用该重组枯草芽孢杆菌制得的转氨酶用于合成西他列汀,由化合物II作为起始原料,在缓冲液、助溶剂、辅酶PLP、氨基供体的存在下,经转氨酶催化转化为西他列汀,其反应路线为,

本发明公开了一种AKP异源表达工程菌,以枯草芽孢杆菌(B.subtilis)为宿主,在该宿主细胞内转入携带有大肠杆菌(E.coli)phoA基因的重组质粒后而获得；所述大肠杆菌phoA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-3中任一项所示。还公开了该AKP异源表达工程菌的构建方法以及利用该AKP异源表达工程菌制备高酶活性碱性磷酸酶的方法。该AKP异源表达工程菌发酵的浓缩酶蛋白作为酶制剂,热稳定性好,酶活性高,对炎症有抑制作用,可增强仔猪免疫力和抗病力,促进动物的生长发育,为生猪产业提供可持续发展动力。

本发明公开了一种微生物基因表达命运共同体及其构建方法和应用,所述微生物基因表达命运共同体至少包括细胞必需基因和编码产物合成途径相关的基因,必需基因与产物合成途径相关基因共表达,可实现生物细胞与产物生死与共,实现了产品的稳定生产,提高了生产效率。通过将微生物必需基因与编码产物合成路径的基因串联表达,减小了微生物对环境变化的抗逆性,实现了更稳定的目的基因表达,使得生物制造的限制性和制约条件降低,更有利于以后的放大生产和提高产品的产率。该方法将在生物制造和生物工业技术方面发挥重要作用,大幅度降低产品的制造成本。

本发明公开了一种枯草芽孢杆菌角蛋白酶的异源表达与表征及其在羊皮脱毛中的应用,属于生物技术领域。本发明所述的角蛋白酶基因全长是通过挖掘Bacillus sp. LCB12全基因数据而获得,其基因全长1140bp,编码379个氨基酸,并通过PCR体外扩增了该基因。本发明为首次实现角蛋白酶VT104K基因在枯草芽孢杆菌SCK6中的异源表达、纯化和表征,并将重组角蛋白酶应用于山羊皮脱毛。该角蛋白酶具有良好的酶学特性,且脱毛性能优异,在制革工艺中拥有广阔的应用前景。

本发明公开了一种胞外金属蛋白酶基因及其应用,属于生物技术领域。本发明所述的empr基因全长是通过提取芽孢杆菌LCB14的基因组DNA,通过PCR技术得到的。该基因全长1566bp,编码521个氨基酸。本发明实现了empr基因在枯草芽孢杆菌的克隆、异源表达、纯化,蛋白酶学性质表征及其在羊皮脱毛中的应用。蛋白酶empr在羊皮脱毛过程中展现出优秀的脱毛性能,在皮革脱毛应用中具有广阔的前景。

本发明公开了一种密码子优化的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因及其应用,属于生物工程技术领域。本发明以苜蓿中华根瘤菌来源的Nodc基因为出发序列,按照解淀粉芽孢杆菌的密码子偏好性将该N-乙酰氨基葡萄糖转移酶优化密码子后全基因合成,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。将密码子优化后的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶构建重组载体,转入宿主解淀粉芽孢杆菌中,得到能够发酵生产几丁寡糖的基因工程菌。该基因工程菌胞外发酵液中几丁寡糖浓度达到676mg/L,其中几丁四糖和几丁五糖的含量分别为246mg/L和430mg/L,表明利用该重组菌株可实现胞外合成几丁四糖、几丁五糖等几丁寡糖为主的新发酵工艺。

本发明公开了一种稳定表达几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用,属于基因工程技术领域。本发明通过筛选整合位点,提高整合拷贝数,构建了可以稳定高效表达几丁二糖脱乙酰酶Dac的食品安全级工程菌株。与现有技术相比,几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活得到了极大的提高,发酵周期大大缩短。本转化方法简单易行,条件温和,高效环保,产物得率高。此法有利于解决传统合成法中污染严重,产率低下等问题,而且此法易于控制,利于推广应用。

本发明涉及通过基因突变和发酵工艺优化提高枯草芽胞杆菌表面活性素(Surfactin)产量的方法及其应用,属于生物技术领域。本发明以枯草芽胞杆菌Bs916(CGMCC No.0808)为原始菌株,以之前构建的高产表面活性素的菌株B9ΔdegU(申请号：201911313407.9)为基础,利用同源重组原理,再次突变枯草芽胞杆菌Bs916基因组中的bmyA基因,获得了同时突变degU和bmyA的双突变菌株B9ΔdegUΔbmyA(B9BD)。随后,以菌株B9ΔdegUΔbmyA(B9BD)为出发菌株,通过Plackett-Burman实验设计、中心组合实验设计(CCD)和响应曲面法(RSM)优化了B9ΔdegUΔbmyA(B9BD)高产Surfactin的发酵培养基成分。经过分离纯化Surfactin后,测定了Surfactin对水稻纹枯病菌和白叶枯病菌的EC-(50),并利用盆栽试验初步评估了Surfactin对水稻纹枯病和白叶枯病的防治效果。