本发明提供了一种VWB-attP和φC31-attP整合酶介导的基因重组方法及在链霉菌中应用。具体地,本发明利用VWB-attP整合酶和φC31-attP整合酶系统介导的位点特异性整合机制将这两种整合酶模块构建在同一个含有目的基因的质粒中,通过属间接合转移可快速将需要表达的目的基因以多拷贝的数量重组至链霉菌染色体的相应attB位点上。本发明的方法在阿维菌素,红霉素和林可霉素产生菌中进行了应用。

本发明提供了一种靶蛋白-内含肽-磁小体融合蛋白及其构建的产物自动提纯的智能细菌和制备方法,其中,融合蛋白是由靶蛋白、内含肽以及磁小体膜蛋白之间直接串联连接或通过柔性Linker可操作地连接构成；本发明还提供了一种靶蛋白-内含肽-磁小体融合基因,融合基因包括磁小体膜蛋白基因的上游序列、纳米抗体基因、内含肽基因、磁小体膜蛋白基因和磁小体膜蛋白基因的下游序列；本发明还提供了通过靶蛋白-内含肽-磁小体融合基因构建的产物自动提纯的智能细菌；本发明的智能细菌较传统原核生物表达系统具有靶蛋白提纯条件温和、无需外加试剂、成本低、操作简单、纯度高,且对靶蛋白的产量等影响小。

本发明公开了一种牛瘤胃微生物纤维素酶eg基因在乳酸菌表达中的应用,属于生物工程技术领域。提取牛瘤胃总DNA,以NCBI的eg基因序列为设计引物,以牛瘤胃总DNA为模板,经PCR扩增eg片段,将其克隆至表达载体pMG36e中获得分泌型表达载体pMG36e::eg；将测序正确后的重组质粒电转导入L.lactis NZ9000,得到L.lactis NZ9000/pMG-36e::eg重组菌株。本发明克隆了牛瘤胃的纤维素酶eg基因,通过连接分型表达质粒,成功构建出分泌型表达质粒pMG36e::eg。从牛瘤胃中克隆得到一个基因大小为1500bp的的条带,该酶分子量为50kD,刚果红染色有明显水解圈,DNS法测定酶活力之后,酶活值为1.8195U/mL表明该酶具有一定的活性。

本发明公开了魏氏柠檬酸杆菌ansB基因敲除突变株及其应用。它是敲除了ansB基因的魏氏柠檬酸杆菌,所述的ansB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所得到的敲除魏氏柠檬酸杆菌ansB基因的工程菌,在25°C和30°C,以及LB、TSB和NB等培养基中培养,提高了其在聚苯烯材料上的生物被膜形成能力,从而拓宽了魏氏柠檬酸杆菌用于重金属离子吸附和构建细胞蛋白合成微工厂等的应用场景和范围。

本发明涉及一种稳定表达增强型绿色荧光蛋白的鼠伤寒沙门氏菌菌株及其构建方法,属于基因工程技术领域。该鼠伤寒沙门氏菌绿色荧光菌株分类命名为Salmonella enterica subsp.enterica serovar Typhimurium,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏号为CGMCC No.22723；保藏时间为2021年6月16日。该菌株以ATCC 14028沙门氏菌菌株为基础,通过导入PagC-EGFP质粒以实现胞内沙门氏菌的荧光观察,解决了现有荧光沙门氏菌菌株难获得、荧光信号不强、感染能力弱、适应性不广的缺点,是研究沙门氏菌与细胞的互作机理研究的理想的生物材料。

本发明公开了一组伯克氏菌基因组合理简约化突变株与一组基因组合理简约化伯克氏菌底盘菌株及其构建方法和其在β-变形菌纲来源的天然产物的高效异源表达中的应用。其中所述基因组合理简约化的突变株是DT8,DT9和DT10,是连续删除转座酶、前噬菌体、基因组岛等细胞生长非必需基因,并在此基础上继续删除在该菌中本底表达的生物合成基因簇后获得。同时本发明通过在DT8,DT9和DT10基因组上定点插入phiC31attB位点构建了一组基因组合理简约化的伯克氏菌底盘菌株DT8-attB,DT9-attB和DT10-attB,并实现了将所述底盘菌株应用于β-变形菌纲中天然产物如埃博霉素的产量优化及隐秘生物合成基因簇的高效异源表达。有力扩展了革兰阴性菌异源宿主底盘菌,促进了细菌中新型天然产物的挖掘。

本发明公开了一种能够被具有遗传毒性的物质或具有DNA损伤能力的辐射诱导产生发光的基因工程菌及其构建方法与应用。该基因工程菌暴露于遗传毒物或辐射后,产生生物发光,发光强度与遗传毒性呈剂量效应关系。该基因工程菌通过在Acinetobactersp.ADP1染色体DNA上的lexA基因片段插入发光基因片段luxCDABE和卡那霉素抗性基因而得到。可被用于评价样品的遗传毒性和辐射的DNA损伤强度。

本发明公开了一种通过过表达基因psrA提高粘质沙雷氏菌合成灵菌红素的方法,属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明通过在粘质沙雷氏菌中过表达LysR家族转录调控因子PsrA编码基因BVG90-12635(psrA),显著提高了粘质沙雷氏菌合成灵菌红素能力；将利用本发明的方法制备得到的重组粘质沙雷氏菌在发酵培养基中发酵72h产灵菌红素发现,重组菌株发酵产灵菌红素能力较野生型菌株JNB5-1相比,提高了33.58％。

本发明涉及一种日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子及其应用。本发明成功克隆了日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子序列,并成功构建了日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子pGL3-Cathelicidin2-pro荧光素酶报告质粒。实验证明日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子可被革兰氏阴性菌重要表面抗原LPS以及嗜水气单胞菌诱导激活。日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因启动子的克隆及其强启动子活性的诱导表达分析,为研究日本鳗鲡抗菌肽Cathelicidin2基因的表达调控机制、鱼类抵御病原菌感染的天然免疫应答机制、特别是重要的鱼类炎症相关NF-κB和MAPK信号通路网络调控机制的研究提供良好的实验系统,为利用该启动子构建表达载体高效表达外源基因或将该启动子应用于转基因鱼构建创造条件。

本发明公开了一种鸡白细胞介素17B重组乳酸菌免疫制剂的制备和应用。本发明提供了特异蛋白的应用,为如下(a1)或(a2)：(a1)制备免疫促进剂；(a2)作为免疫促进剂；所述特异蛋白为如下(b1)或(b2)或(b3)：(b1)序列表的序列1中第28至199位氨基酸残基组成的蛋白质；(b2)序列表的序列1中第1至199位氨基酸残基组成的蛋白质；(b3)序列表的序列1所示的蛋白质。本发明还保护所述特异蛋白。本发明的特异蛋白可以促进淋巴细胞增殖,抑制致病微生物的生长,促进特异性抗体分泌,促进黏膜抗体分泌,提高动物的免疫能力与存活率。