本发明公开了一种表达小鼠p53a或p53b蛋白质粒及其构建方法和应用,该构建方法包括：提取小鼠组织中的RNA,并反转录为cDNA；以cDNA为模板对表达p53a和p53b蛋白的基因分别进行PCR扩增；将表达p53a蛋白的基因片段、表达p53b蛋白的基因片段以及pCMV-HA经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,回收酶切产物,连接、转化大肠杆菌,提取重组质粒；酶切鉴定和测序正确的重组质粒进行转染扩增,提取质粒；该构建方法具有快速、准确、高效的特点。

本发明公开一种基于假attP位点自发定向整合的通用型微环DNA表达载体及其构建方法与应用,其中该微环DNA表达载体由目的基因、PPAP序列和微环DNA质粒构成,所述PPAP序列包括依次连接的polyA加尾信号、启动子、反向attB序列、ΦC31整合酶基因和终止密码子,所述反向attB序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,所述的ΦC31整合酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示,所述终止密码子的核苷酸序列为TGA。本发明提供的微环DNA表达载体能够自发定向、特异性地整合到真核细胞基因组内假attP位点,避免质粒随机插入引起的基因表达沉默和其他安全隐患,从而使目的基因安全持续高效表达,具有较高的生物安全性。

本发明公开了一种基于转录调控序列重布的反向遗传操作方法及其应用,其中,所述方法为根据HuN4-F112感染性克隆全长测序以及转录调控前导序列(Leader TRS),下游转录调控序列(body TRSs)一级核心6碱基序列的鉴定,将HuN4-F112全基因组设计为分别包含Leader TRS,Body TRSs在内的六段基因组序列,分别设计用于Leader TRS,Body TRSs核心6碱基序列C-(5)C-(6)定点突变的引物,获得全基因组转录调控序列整体突变的基因组片段。该TRS circuit突变PRRS弱毒疫苗株能够有效抵抗自然环境中普遍发生的基因组间重组现象,对临床上PRRS的有效防控有重要意义。

本发明涉及生物技术领域,特别涉及一种融合成像基因及其慢病毒表达质粒、慢病毒和细胞,其制备方法和用途。融合成像基因包括生物发光成像基因、荧光蛋白基因和钙成像基因,三种基因之间通过连接基团连接。将融合基因插入改造后的慢病毒表达质粒,获得携带融合成像基因的慢病毒颗粒。慢病毒颗粒可用于不同类型细胞的感染,获得融合成像基因标记的细胞。经本发明中的融合成像基因标记的细胞,可以同步进行细胞的数量成像检测、形态成像检测以及钙活动功能成像检测,在细胞命运追踪方面具有重要用途。

本发明属于神经工程技术领域,具体涉及一种在神经元细胞特异性高效表达的迷你启动子pAPP。本发明提供了一种迷你启动子pAPP及其应用,所述启动子pAPP的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明另一方面提供了应用该启动子pAPP在重组腺相关病毒载体、重组腺相关病毒、重组腺相关病毒的试剂盒、基因治疗载体中,以及在制备操控神经细胞、基因编辑和/或基因治疗试剂中的应用。本发明提供的迷你启动子pAPP使外源基因得以在全脑范围内的神经元中高效表达,在基因编辑和基因治疗领域具有广泛的应用前景。

本发明的发明名称为合成子的形成。除了其它,本公开提供一种组合物,其包括：5’-3’核酸外切酶；链置换聚合酶；和任选地,单链DNA结合蛋白质和/或连接酶。另外还描述形成合成子的多核苷酸组装方法以及用于进行该方法的试剂盒。

本发明公开了一种牛瘤胃微生物纤维素酶eg基因在乳酸菌表达中的应用,属于生物工程技术领域。提取牛瘤胃总DNA,以NCBI的eg基因序列为设计引物,以牛瘤胃总DNA为模板,经PCR扩增eg片段,将其克隆至表达载体pMG36e中获得分泌型表达载体pMG36e::eg；将测序正确后的重组质粒电转导入L.lactis NZ9000,得到L.lactis NZ9000/pMG-36e::eg重组菌株。本发明克隆了牛瘤胃的纤维素酶eg基因,通过连接分型表达质粒,成功构建出分泌型表达质粒pMG36e::eg。从牛瘤胃中克隆得到一个基因大小为1500bp的的条带,该酶分子量为50kD,刚果红染色有明显水解圈,DNS法测定酶活力之后,酶活值为1.8195U/mL表明该酶具有一定的活性。

本发明公开了一种小鼠来源的抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单链抗体及其制备方法。使用小鼠来源的抗PEDV单克隆杂交瘤细胞,扩增IgG抗体的重链可变区和重链可变区序列,经linker相连,克隆进原核表达载体pET-32a,单链抗体的氨基酸序列如所示SEQ ID No.2所示。经IPTG诱导表达、亲和层析纯化得到的单链抗体分子量约为29kDa,ELISA显示单链抗体可特异性识别PEDV,假病毒中和试验显示单链抗体可在细胞水平上中和PEDV假病毒感染PK15细胞的能力。抗PEDV单链抗体有望中和PEDV在仔猪体内的感染活性,阻断病毒在仔猪群中的传染。

本发明公开了一种构建简便、高效的植物多基因编辑载体方法,其包括pMK-(1-12)中间载体及终载体pMMK-Cas9。载体构建的方法包括以下步骤：将多个sgRNA通过多顺反子tRNA-gRNA方式连接到pMK(1-12)中间载体上,每个中间载体上可以连接1-8个sgRNAs,得到pMK(1-12)-PTG载体；将多个pMK(1-12)-PTG载体上的U6/U3表达盒连接到pMMK-Cas9载体上,pMMK-Cas9可以连接2个到7个pMK(1-12)-PTG载体上的U6/U3表达盒,得到pMMK-PTG载体,根据不同的靶位点和小载体组合,可达到2-56个靶位点的多基因编辑。整个流程只需要一次PCR反应和两次“金门”连接体系即可完成,流程简单快速。本发明还以该载体敲除水稻LEA基因家族25个成员为例,验证该载体多基因编辑的高效性。

本发明涉及一种果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体、基因工程菌及构建方法和蛋白表达方法,属于蛋白表达技术领域。本发明所述果糖胺脱糖酶毕赤酵母表达载体包括骨架载体和编码果糖胺脱糖酶的基因；所述编码果糖胺脱糖酶的基因的核苷酸如SEQIDNO.1所示。本发明所述载体有利于该酶的工业化生产,生产方法绿色,安全,环保,无污染,可控,对氨基葡萄糖的大规模制备有益,会产生较大的社会价值和经济效益。