本发明公开了一种人肝纤维化诱导模型的工具细胞株构建方法,属于生物技术领域。本发明提供一种重组慢病毒载体,包括插入有绿色荧光基因EGFP及人TGF-β1基因的慢病毒载体,所述慢病毒载体选用Tet-On诱导表达慢病毒系统,基于该重组慢病毒载体可构建一种人肝纤维化诱导模型的工具细胞株。该重组慢病毒载体能通过诱导剂Dox持续诱导TGF-β1的过表达,弥补了传统肝纤维化诱导方法过程中需要持续添加重组的TGF-β1因子操作繁琐、费时、成本高、批次差异大等缺陷；且对细胞的毒性小,且制备方法简单,易于工业化生产。

本发明涉及生物技术领域,特别涉及一种融合成像基因及其慢病毒表达质粒、慢病毒和细胞,其制备方法和用途。融合成像基因包括生物发光成像基因、荧光蛋白基因和钙成像基因,三种基因之间通过连接基团连接。将融合基因插入改造后的慢病毒表达质粒,获得携带融合成像基因的慢病毒颗粒。慢病毒颗粒可用于不同类型细胞的感染,获得融合成像基因标记的细胞。经本发明中的融合成像基因标记的细胞,可以同步进行细胞的数量成像检测、形态成像检测以及钙活动功能成像检测,在细胞命运追踪方面具有重要用途。

本发明公开了一种CRISPR/Cpf1基因编辑系统及其构建方法和在赤霉菌中的应用,该系统为骨架质粒pCpf1Ff-DR,包括Fncpf1基因、功能性crRNA基因、启动子pGPD、启动子pTRPC、强RNA聚合酶III型启动子5srRNA、潮霉素筛选标记hph。本发明系统效率高、通用性强、易于操作而被迅速应用于丝状真菌赤霉菌中,通过该基因编辑系统可用于赤霉菌中实现长达17kb的比卡菌素基因簇的敲除。本发明首次在赤霉菌中实现大片段基因敲除,且首次发现比卡菌素基因簇敲除有利于提高赤霉素产量,该方法有望进一步用于改造赤霉素工业菌,缩短菌株升级的时间,为提高赤霉素产量、增加经济效益提供了强有力保障。

本发明涉及一种稳定表达增强型绿色荧光蛋白的鼠伤寒沙门氏菌菌株及其构建方法,属于基因工程技术领域。该鼠伤寒沙门氏菌绿色荧光菌株分类命名为Salmonella enterica subsp.enterica serovar Typhimurium,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏号为CGMCC No.22723；保藏时间为2021年6月16日。该菌株以ATCC 14028沙门氏菌菌株为基础,通过导入PagC-EGFP质粒以实现胞内沙门氏菌的荧光观察,解决了现有荧光沙门氏菌菌株难获得、荧光信号不强、感染能力弱、适应性不广的缺点,是研究沙门氏菌与细胞的互作机理研究的理想的生物材料。

本发明提供了一种近乎完整染色体倒置的平衡染色体以及具有平衡染色体动物模型的构建方法,使用位点特异性重组酶系统介导的重组技术,在染色体着丝粒侧插入片段1,包括位点特异性重组酶系统一侧识别位点,该位点的上游具有正选择标记基因表达元件片段A；在端粒侧插入片段2,包括位点特异性重组酶系统另侧识别位点,该位点的上游具有反向的正选择标记基因表达元件片段B,经相应的位点特异性重组酶诱导实现两个位点特异性重组酶系统识别位点之间的序列倒置,正选择标记基因表达元件片段A和B组合实现正选择标记基因的表达,利用正负筛选法筛选得到平衡染色体。本发明所述方法可用于建立所有染色体近乎全部倒置的平衡染色体动物品系。

本发明提供一种利用分裂单一筛选标记实现对多基因转化的慢病毒载体表达系统,包括慢病毒载体表达系统、其构建方法以及在多基因转化中的应用。利用本发明的慢病毒载体表达系统,可以用单一筛选标记实现多个目的基因的转化,可以在多种细胞中提高表达系统的包装率和提高目的基因的表达率。

本发明公开了一种PHF6～(△)和JAK3～(M511I)双突变急性T淋巴细胞白血病小鼠模型构建方法和应用。本发明利用Vav1-Cre小鼠和Phf6～(fl/fl)小鼠交配获得Vav1-Cre；Phf6～(fl/Y)(Phf6～(-/Y))雄性小鼠；利用Mx1-Cre小鼠和Phf6～(fl/fl)交配获得Mx1-Cre；Phf6～(fl/Y)雄性小鼠,分别富集两种小鼠骨髓中Lin～(-)细胞,感染过表达GFP-JAK3～(M511I)的逆转录病毒,通过尾静脉注射,将GFP+细胞移植入致死剂量照射的受体小鼠,构建得到两种T-ALL白血病小鼠模型。本申请模型可以快速在小鼠中传代,模拟PHF6基因和JAK3基因双突变的T-ALL病人的白血病进程,用于靶向治疗药物筛选和疗效评价。

本发明公开了一种抗新型冠状病毒药物筛选与评价模型的建立方法及应用,基于荧光蛋白Venus的两个非荧光互补片段VN155和VC155重新组合形成荧光蛋白发出荧光信号,并利用2A多肽自我切割特性实现多基因同时表达,来检测新型冠状病毒Spike蛋白与ACE2受体的结合效应,可用于能切断新型冠状病毒吸附并感染人体细胞的抗SARS-CoV-2药物的筛选与临床前药效评价。本发明具有简单、快速、微量、直观的优点,结果重现性好,特异性强、灵敏度高,干扰因素少,不易出现假阳性和假阴性,适用于抗SARS-CoV-2新药研发。

本发明涉及植物基因工程领域。具体而言,本发明涉及一种高效西瓜遗传转化体系及应用,包括在西瓜遗传转化中包含AtGRF5、TaGRF4、OsGIF1、ZmWUS和ZmBBM等生长调节基因。本发明首次发现在西瓜转化和/或再生过程中表达AtGRF5、TaGRF4、OsGIF1、ZmWUS或ZmBBM基因能够促进西瓜作物的遗传转化效率,其中AtGRF5能显著提高西瓜遗传转化效率约80倍,为遗传育种提供宝贵的基因资源。本发明还提供了一种使用荧光蛋白DsRed2作为遗传转化筛选标记的方法,简化遗传转化筛选操作。该体系在西瓜中的表达使用,能够有效提高西瓜遗传转化育种效率,降低育种成本。

本发明涉及一种高产ε-聚赖氨酸的基因工程菌株淀粉酶产色链霉菌ΔcadA(Streptomyces diastatochromogenesΔcadA)并提高ε-聚赖氨酸发酵水平的方法,所述高产基因工程菌株的构建步骤如下：步骤1,构建敲除赖氨酸脱羧酶基因cadA质粒pJTU 412-ΔcadA；步骤2,缺失cadA基因菌株的获得,即高产ε-聚赖氨酸的基因工程菌株淀粉酶产色链霉菌ΔcadA。经过实验证实,该链霉菌基因工程菌株在相同情况下较原始菌株淀粉酶产色链霉菌TUST生产ε-聚赖氨酸的能力显著提高了35.6％,为ε-聚赖氨酸生产提供了优良菌种。