本发明公开了一种多方法联用的大片段DNA重组方法,包括以下步骤：S确认好需要进行拼接修饰的BAC,根据需要将BAC修饰好重组酶位点,再通过RMCE进行拼接,拼接完成的BAC进行下一步的拼接；当三个BAC拼接好后再通过phes负筛将不需要的重组酶位点删去,最终得到无缝拼接的BAC；本发明突破了BAC大小限制,原则上最大能到450kb。解决了BAC修饰过程中会引入重组酶位点的问题。提高了整个方案的可操作性,便于进行多个大片段的整合和修饰。

本发明涉及基因工程技术领域,尤其涉及一种基于密码子简并性的快速TALE表达载体构建方法。本发明针对现有TALE模块的组装需要大量载体库,以及构建过程复杂的不足,从头设计了基于引物扩增、串接和等温装配的TALE载体组装策略。本发明利用基础引物扩增出RVD模块三联体,快速获得64个三联体模块组合；然后在通过串接引物依序扩出多个三联体(或四联体),并利用等温装配的方法构建各种TALE载体。本发明简单可行,易于掌握,载体组装过程仅需1.5到2个小时,可以快速构建靶向24bp内任意长度和组合的DNA序列的TALE载体以及TALE基础上的衍生效应子载体。

本发明的发明名称为合成子的形成。除了其它,本公开提供一种组合物,其包括：5’-3’核酸外切酶；链置换聚合酶；和任选地,单链DNA结合蛋白质和/或连接酶。另外还描述形成合成子的多核苷酸组装方法以及用于进行该方法的试剂盒。

本发明提供一种利用分裂单一筛选标记实现对多基因转化的慢病毒载体表达系统,包括慢病毒载体表达系统、其构建方法以及在多基因转化中的应用。利用本发明的慢病毒载体表达系统,可以用单一筛选标记实现多个目的基因的转化,可以在多种细胞中提高表达系统的包装率和提高目的基因的表达率。

本发明涉及分子生物学和免疫学技术领域,具体涉及一种敲除H3L基因的重组痘苗病毒载体；重组痘苗病毒载体带有H3L同源重组臂序列,重组病毒载体为用来构建在痘苗病毒H3L基因区域内插入外源基因的痘苗病毒载体；本发明提供了一种可以逃逸体内存在的既有抗痘苗病毒中和抗体的重组痘苗病毒载体,重组痘苗载体的H3L编码基因被敲除或破坏,不能正常表达H3L基因,该痘苗病毒载体可以作为肿瘤疫苗或基因治疗载体,可以用于预防或治疗多种肿瘤。

本发明公开了含佐剂基因的羊支原体肺炎二价核酸疫苗的构建方法,具体步骤如下：步骤一、Mo/Mmc基因组的提取：S1、Mo/Mmc贵州株的复苏与培养；S2、Mo/Mmc贵州株DNA的提取；步骤二、P113-LppA-IL-2融合基因扩增：S1、粘膜免疫佐剂基因、绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种抗原基因扩增；S2、P113-LppA融合基因扩增；S3、P113-LppA-IL-2融合基因扩增；步骤三、含粘膜免疫佐剂基因的羊支原体肺炎二价核酸疫苗的制备。本发明通过选择两个不同抗原基因和黏膜免疫佐剂基因研制出核酸疫苗,可有效针对羊支原体肺炎DNA疫苗免疫效果弱等问题,解决目前疫苗研发所面临的诸多问题。