本发明涉及一种可以快速检测鸡球虫耐药性的分子标记、检测方法及试剂盒。本发明中克隆了3个耐药相关基因EtENO2、EtPGK和EtAKRO。比较了3个基因在实验室诱导的两个耐药株(地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株)和药物敏感株的mRNA的转录水平差异以及蛋白的翻译水平差异,同时检测了田间分离株的耐药性,为今后进一步研究球虫耐药性产生的分子机理及建立快速检测田间球虫耐药性提供了理论基础。

本发明公开了一种基于群体感应的自诱导调控系统,包括luxI、luxR和egfp,其中,控制luxI和luxR表达的启动子选自P-(luxI)、P-(BB)或P-(J23100)；控制egfp表达的启动子选自P-(luxI)、P-(luxI)(T-38C)或P-(luxI)(C-77T)。所述的基于群体感应的自诱导调控系统在大肠杆菌工程菌的目的基因表达、自动调控中的应用,在制备褐藻胶裂解酶、酯酶中的应用。本发明还公开了包含该基于群体感应的自诱导调控系统的重组表达载体、重组工程菌。本发明对群体感应系统中的启动子进行改造筛选,构建了适合褐藻胶裂解酶和酯酶的自诱导调控系统,可实现褐藻胶裂解酶的高密度、高酶活发酵。

本发明提供了一种靶蛋白-内含肽-磁小体融合蛋白及其构建的产物自动提纯的智能细菌和制备方法,其中,融合蛋白是由靶蛋白、内含肽以及磁小体膜蛋白之间直接串联连接或通过柔性Linker可操作地连接构成；本发明还提供了一种靶蛋白-内含肽-磁小体融合基因,融合基因包括磁小体膜蛋白基因的上游序列、纳米抗体基因、内含肽基因、磁小体膜蛋白基因和磁小体膜蛋白基因的下游序列；本发明还提供了通过靶蛋白-内含肽-磁小体融合基因构建的产物自动提纯的智能细菌；本发明的智能细菌较传统原核生物表达系统具有靶蛋白提纯条件温和、无需外加试剂、成本低、操作简单、纯度高,且对靶蛋白的产量等影响小。

本发明属于植物基因工程技术领域,具体公开了一种胡椒PNPAL3基因,核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明还公开了上述胡椒PNPAL3基因在胡椒抗瘟病中的应用。本发明公开的胡椒PNPAL3基因能够提高热引1号抗瘟病能力；对PnPAL3基因进行烟草转化,得到木质素总含量升高、G型木质素含量升高、抗病性明显提高的转基因烟草植株。

本发明公开了细菌生物被膜核心胞外多糖裂解酶PelAN及其制备方法和应用,属于微生物工程技术领域。PelAN的制备方法包括设计编码细菌生物被膜核心胞外多糖裂解酶PelAN的基因序列,将其克隆到pET28b表达载体中后导入到DE3感受态细胞中,得到DE3工程菌株后扩大培养,诱导表达,离心收集菌体并重悬于细胞破碎液中,冰浴超声破碎,高速离心,收集上清液,纯化并收集PelAN蛋白得到。本发明通过原核表达系统构建重组表达PelAN蛋白,步骤简单且操作方便,适用于大量提取高纯度、高活性的PelAN蛋白,弥补其工业化制备的技术空白,为PelAN靶向清除革兰氏阴性细菌生物被膜奠定基础。

本发明公开了一种松材线虫效应子BxSCD1互作蛋白及其编码基因和应用,属于分子生物学技术领域。松材线虫效应子BxSCD1互作蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,表达该蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本申请从松材线虫分泌的效应子及寄主靶标出发,研究寄主松树和松材线虫之间的相互作用,发现BxSCD1沉默能够延缓黑松发病,BxSCD1抑制了黑松病程相关基因的表达；通过BxSCD1与松树乙烯合成酶基因ACO1互作,证明BxSCD1可以通过影响黑松的乙烯合成酶ACO1的表达量,影响松树的免疫反应,对于揭示松材线虫的致病机理及早期检测松材线虫病的发生等方面具有重要的科学意义。

本发明公开了一种代谢工程大肠杆菌发酵制备广藿香醇的方法,属于生物工程领域。本发明改造广藿香醇合酶及宿主菌株,获得能够高效发酵生产广藿香醇的重组菌及其发酵方法。该重组菌株能够以廉价的葡萄糖为底物,发酵生成高附加值的广藿香醇,摇瓶发酵96h广藿香醇产量达到338.6mg/L,得率为48.6mg/g干2细胞重量,体积生产强度为84.6mg/L/d。在5L发酵罐中,广藿香醇产量可达到970.1mg/L,体积生产强度为199mg/L/d。

本发明属于生物技术和发酵领域,具体公开了生物催化合成L-4-Cl-犬尿氨酸或L-4-Br-犬尿氨酸的方法及应用。本发明以廉价易得的6-Cl/Br-吲哚和L-丝氨酸为底物,在Pf0A9酶和Tar13酶的串联催化下一步合成L-4-Cl/Br-犬尿氨酸。同时通过构建Pf0A9-Tar13双基因表达质粒,成功实现了L-4-Cl/Br-犬尿氨酸的发酵生产。与之前已报道的有机和生物合成方法相比,本发明所构建的生物合成通路不仅降低了合成过程中所用酶的数量,而且还能应用于发酵生产,因此更加经济环保,具有很大的市场开发价值。

本发明公开了一种具有广谱裂解活性的抗菌肽P104、裂解酶LysP53及其应用。所述抗菌肽P104的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述抗菌肽P104的基因序列如SEQ ID NO.3所示；所述裂解酶LysP53的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,所述裂解酶LysP53的基因序列如SEQ ID NO.4所示；所述抗菌肽P104和所述裂解酶LysP53在体外对鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌具有较好的裂解效果,能广谱裂解革兰氏阴性菌；同时所述裂解酶LysP53能在大肠杆菌中进行可溶性表达,酶的活性高,因此,所述抗菌肽P104和所述裂解酶LysP53在抗感染类药物的研发中具有较好的应用前景。

本发明公开了碳酸酐酶SaCA及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质,来源于盐螺旋菌(Salinispirillum sp.),是一种碳酸酐酶,命名为SaCA蛋白,是由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明还保护SaCA蛋白作为碳酸酐酶的应用。本发明对于相关环境保护、医药领域等,具有重大的应用前景。