本发明公开了一种抗HE4的纳米抗体,所述纳米抗体具有独特的3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3,该抗体亲和力可达到1.193E-11,而且能够在HE4血清检测特别是双抗体夹心法中获得优异的检测效果。本发明还提供了一组用于双抗体夹心法检测HE4的纳米抗体组合以及该抗体组合在制备HE4抗原检测试剂盒中的应用,所述组合包括作为捕获抗体的抗HE4二价纳米抗体和作为检测抗体的抗HE4单价纳米抗体。