本发明公开了一种采用两步法亚临界萃取技术制备蛋黄卵磷脂的方法,属于亚临界流体萃取技术领域。本发明以冷冻蛋黄凝胶为原料,经稀释、均质、离心、喷雾干燥,得到蛋黄粉,再采用两步法亚临界萃取技术制备蛋黄卵磷脂,无溶剂残留,所得产品中卵磷脂的得率高达92.7%,纯度高达95.8%,可直接用于药品、食品、保健品。本发明的方法萃取温度和压力温和,有利于保护副产物蛋黄油中高价值成分,如DHA、类胡萝卜素、叶酸等,在医药和食品行业应用潜力巨大,同时获得的另一种副产物天然抗体蛋黄免疫球蛋白具有较强的抗幽门螺杆菌活性,能有效治疗胃溃疡等疾病。因此本发明可实现蛋黄资源的充分利用,提高蛋黄的综合利用价值。